МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
(Минсельхоз России)
ПРИКАЗ

№ 105
от   3 апреля 2006 г.

                                                      Москва

Об утверждении Ветеринарных правил лабораторной диагностики гриппа птиц

В целях повышения эффективности борьбы с гриппом птиц и в соответствии с пунктом 5.2.11 Положения о Министерстве сельского хозяйства Российской Федерации, утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации от 24 марта 2006 г. № 164 (Собрание законодательства Российской Федерации, 2006, № 14, ст. 1543), приказываю:
утвердить Ветеринарные правила лабораторной диагностики гриппа А птиц согласно приложению.

Мин
А.В.Гордеев

Приложение
к приказу Минсельхоза России
от 3 апреля 2006 г. №   Ю5
ВЕТЕРИНАРНЫЕ ПРАВИЛА
лабораторной диагностики гриппа А птиц
1.       Область применения
1.1.	Настоящие Правила устанавливают обязательные требования к
организации лабораторной диагностики гриппа А птиц (далее - грипп птиц).
1.2.	Положения настоящих правил обязательны для выполнения на
территории    Российской    Федерации    органами    государственной    власти,
предприятиями   или   иными   хозяйствующими   субъектами,   учреждениями,
организациями,     общественными     объединениями,     независимо     от     их
подчинения и форм собственности, должностными лицами и гражданами.
2.       Общие положения
2.1.	Диагностические лабораторные исследования и серологические
тесты по определению напряженности поствакцинального иммунитета (далее
-  лабораторные   тесты)   проводят   в   специализированных   ветеринарных
учреждениях.
2.2.	Лабораторная диагностика гриппа птиц направлена на выявление в
исследуемых объектах ветеринарного надзора:
вируса гриппа птиц; РНК вируса гриппа птиц; антигенов вируса гриппа птиц; антител к вирусу гриппа птиц.
2.3.	При проведении лабораторных тестов могут быть использованы
методы лабораторных исследований, применяющие:
тесты, утвержденные в установленном порядке;
тесты,     которые     реализуются     с     использованием     тест-систем, зарегистрированных в установленном порядке в Российской Федерации.
3.       Обязательные требования по отбору проб для проведения диагностики гриппа птиц
3.1.	Отбор   проб   крови   и   патологического   материала   проводит
ветеринарный работник, имеющий специальную подготовку.
3.2.	Пробы  маркируются  и  опечатываются.  К  пробам прилагается
сопроводительный документ, содержащий сведения о дате и месте отбора
3.1.	
проб, юридическом или физическом лице - владельце птицы и месте его нахождения, виде, возрасте птицы и ее состоянии на момент отбора проб.
3.3.	Для    проведения    исследований    осуществляют    отбор    проб
патологическиого материала (органы, ткани головного мозга, легких, трахеи,
селезенки, участков кишечника, почек, сердца) от павшей или убитой с
диагностической целью птицы.
3.4.	От каждого стада птицы отбирают для исследований 5-10 трупов
или    патологический    материал    от    5-10    трупов,    клоакальные    и/или
трахеальные смывы от 10-15 голов, 1-10 сборных проб помета от стада.
У мелких видов птиц для отбора проб используют свежий помет.
Пробу помета рекомендуется отбирать из расчета 1 грамм помета на 60 точек птичника (выгула или вольеры), выбранных по диагонали крест-накрест.
3.5.	Пробы крови для определения антител к вирусу гриппа птиц
рекомендуется отбирать у 25-30 птиц из стада (партии), из одного птичника
(зала) или одного населенного пункта, местности (водоема).
Пробы крови отбирают из подкрыльцовой вены в пробирки, увлажненные физиологическим раствором. Кровь выдерживают до образования сгустка при комнатной температуре, или в термостате при 37° С в течение 1-2 часов, затем обводят иглой или пастеровской пипеткой, отслаивая сгусток крови от стенок пробирки, и оставляют на 16 -18 часов при температуре 2-4° С. Образовавшуюся прозрачную без признаков гемолиза сыворотку отбирают с помощью пипетки в отдельные, чистые пробирки.
Отбор крови допускается проводить с помощью иглы и шприца (или вакуумной пробирки).
Рекомендуется проводить центрифугирование проб крови для получения сыворотки в течение 10-15 минут при 1000 об/мин, для осаждения свободных эритроцитов.
Для серодиагностики используют парные пробы сывороток крови, полученные от больных или инфицированных птиц, в начале заболевания и через 4-10 дней.
3.6.	Пробы    транспортируются    во    влагонепроницаемой    таре,    в
контейнере  с хладоэлементами  или     в термосе  со  льдом.  Допускается
однократное замораживание сывороток.
При транспортировке проб соблюдают установленные ветеринарно-санитарные правила и меры безопасности, предъявляемые к транспортировке биологических материалов, содержащих инфекционные агенты 3-й группы патогенности.
3.7.	Если немедленное исследование проб   невозможно, допускается
сохранять образцы на протяжении 4 дней при температуре 4° С.
При необходимости для увеличения срока хранения диагностические образцы и/или изолят помещают в морозильную камеру с температурой -80°С.

3 4. Методы и сроки проведения лабораторных исследований
4.1. Для установления диагноза на грипп птиц допускается применение следующих методов:
а)	для выявления вируса гриппа птиц - биопроба на СПФ (свободных
от  патогенной  микрофлоры) - цыплятах с обязательным  последующим
подтверждением специфичности биологической реакции;
б)	для выделения вируса гриппа птиц - метод выделения вируса на
СПФ - куриных эмбрионах или в культуре клеток;
в)	для обнаружения антигенов вируса гриппа птиц;
иммуноферментный   анализ   (ИФА)   для   обнаружения   одного   или
нескольких белков вируса;
иммунопреципитация (двойная иммунодиффузия по Оухтерлони (далее - РДП) или иммуноэлектроосмофорез (далее - ИЭОФ);
иммунохроматографические методы (далее - ИХА);
радиоиммунный анализ (далее - РИА);
непрямая гем- и латексагглютинация;
реакция связывания комплемента (далее - РСК);
г)	для      обнаружения      гемагглютинина      (гемагглютинирующей
активности) вируса гриппа птиц:
реакция гемагглютинации (далее РГА) с подтверждением специфичности в реакции торможения гемагглютинации(РТТА);
ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных антител к вирусному гемагглютинину;
д)	для обнаружения РНК вируса:
полимеразная цепная реакция (далее - ПЦР);
ПЦР с последующим секвенированием ее продуктов; Дот-блот и блот гибридизация нуклеиновых кислот;
е)	для обнаружения антител к вирусу гриппа птиц:
ИФА;
РДП и ИЭОФ;
ИХА;
РИА;
РТГА;
РСК;
ж)	для субтипирования вируса по гемагглютинину и нейраминидазе:
РТГА;
сиквенс к ДНК или ПЦР-продукта; ПЦР;
Дот-блот и блот гибридизация нуклеиновых кислот; ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных антител к вирусному гемагглютинину;
з)	для субтипирования противовирусных антител по гемагглютинину:
РТГА;

ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных антител к вирусному гемагглютинину.
4.2.	Применение     иных     тестов     допускается     для     получения
предварительных результатов.
4.3.	Методы проведения лабораторных исследований  реализуются на
основе   утверждаемых   в   установленном   порядке   методик   проведения
обязательных диагностических исследований.
4.4. Сроки проведения лабораторных исследований устанавливаются в зависимости от метода исследования и не могут превышать 1 месяца.